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亲水色谱法检测展青霉素

发表时间：2024-01-30 11:51作者：LUJABIO

亲水色谱法检测展青霉素


-背景介绍-



展青霉素（Patulin，PAT）是一种由曲霉和青霉等真菌产生的次级代谢产物，具有广谱的抗生素特点。但其毒性作用对胃具有刺激作用，会导致反胃和呕吐；所以展青霉素已不再作为治疗用途药物。



图1. 展青霉素化学结构式

展青霉素对人及动物均具有较强的毒性作用，展青霉素对呼吸有妨害作用。摄入体内的展青霉素，通过细胞膜的透过性变化，使膜的物质移动发生异常，从而间接地引起生理呼吸异常。展青霉素已被国际癌症研究机构（IARC）归类为第三类可疑致癌物质。各国及地区已制定相关限量标准，限定水果及其相关制品中的展青霉素含量。欧盟、美国食品与药物管理局FDA规定，果汁产品中展青霉素的最大限量为50μg/kg；世界卫生组织（WHO）规定，苹果汁中展青霉素的最高限量标准为50μg/kg；我国《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB 2761-2017）标准规定，苹果、山楂制品中展青霉素的限量标准为50μg/kg。
展青霉素检测，文献上有报道使用反相液相色谱柱C18检测展青霉素[1]，出现峰型明显前沿问题（图2所示）。《食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定》GB5009.185-2016中采用高效液相色谱法使用T3柱分析展青霉素[2]（图3所示）。美国W公司生产的 Atlantis T3反相色谱柱在为极性化合物提供优异性能、通用性、保留能力与色谱稳定性方面具有行业内领先水平。此外，它还为具有极性范围跨度大的混合物样品提供了具有平衡性的保留能力。
亲水相互作用色谱（HILIC）是近年来发展起来的一种液相色谱技术，该技术以高比例的乙腈缓冲液为流动相，可在不添加离子对试剂的前提下实现对极性化合物的强保留，因此与反相液相色谱有着良好的互补性。
本文采用鹭珈生物独特的化学键合技术对β型超高纯全多孔单分散球形硅胶填料进行修饰改性，使HILIC固定相表面具有酸性、中性和碱性的性质，自主研发LUJASep HILIC亲水柱，具有孔径大小范围可控，高化学稳定性，低固定相流失，pH耐用范围宽，用于改善强极性物质的保留和分离选择性，HILIC色谱柱产品涵盖常规分析柱和超高压柱。

图2.文献报道使用美国T品牌公司的反相液相色谱柱C18检测展青霉素标样谱图

图3.GB5009.185-2016采用美国W公司T3柱分离展青霉素的标准溶液色谱图（100 ng/mL）

-色谱条件-


色谱仪：高效液相色谱仪（Agilent OpenLAB 1260）

色谱柱：LUJASep HILIC柱，4.6 mm x 250 mm，5 μm

洗脱方式：等度洗脱

流动相：纯水/乙腈 = 10/90（v/v）

流速：1.0 mL/min

柱温：35 ℃

紫外检测器：检测波长215 nm

样品：展青霉素标准溶液（浓度10ng/mL）

进样量：10 μL

-标准色谱图-


图4. LUJASep HILIC亲水柱分析展青霉素标准溶液色谱图（10ng/mL）


如图3《食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定》GB5009.185-2016美国W公司T3柱分析展青霉素谱图所示，采用梯度洗脱，分析时间10.731min，使用LUJASep HILIC亲水柱检测展青霉素，分析时间仅需3.062min（图4所示），并且对称因子和拖尾因子均呈现较为出色的分析结果（表1所示）。



表1. 展青霉素色谱峰表信息

序号

峰名称

保留时间（min）

对称因子

拖尾因子

柱效

1

PAT

3.062

0.99095

1.02778

11590


参考文献：
[1] 《果汁中展青霉素的高效液相色谱检测方法》，杨维英、陈梦、周翔、郭瑛，江苏省连云港市产品质量监督检验中心，第六届华东地区色谱质谱学术报告会论文集

[2] 《食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定》，高效液相色谱法，中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会/国家食品药品监督管理总局，GB5009.185-2016


-订货信息-


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